Phần tiếp theo của Secret of the Tomb, đây là bộ phim hoạt hình đầu tiên trong loạt phim Night at the Museum và là phần thứ tư nói chung. Nick Daley đang tiếp bước cha mình với tư cách là người gác đêm tại Bảo tàng Lịch sử Tự nhiên Hoa Kỳ, vì vậy anh ấy biết điều gì sẽ xảy ra khi mặt trời lặn. Nhưng khi Kahmunrah trốn thoát, Nick phải cứu bảo tàng một lần và mãi mãi.

Nate Foster, 13 tuổi, có ước mơ trở thành một ngôi sao nhạc kịch Broadway. Tuy nhiên, cậu bé thậm chí không thể có được một vai tử tế trong các tác phẩm ở trường cấp hai của mình. Dẫu vậy, khi cậu và người bạn thân nhất của mình là Libby quyết định thức hiện một chuyến đi táo bạo đến Thành phố New York để thử giọng cho “Lilo and Stitch: The Musical”.